PCR过程中耐热的DNA 聚合酶详细介绍
上海坤科仪器设备有限公司 / 2014-06-12
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PCR过程中涉及的耐热的DNA 聚合酶有俩种Taq DNA 聚合酶和rTth DNA聚合酶。
● Taq DNA 聚合酶
该酶是从表达克隆嗜热水生菌的DNA 聚合酶基因的大肠杆菌提纯而来。此酶有5’→3’ DNA聚合酶和5’→3’外切酶活性，但是缺乏3’→5’ 外切酶活性。此酶由分子量约为94 千道尔顿的多肽组成。
Taq DNA聚合酶对热稳定，能在较高的温度下利用引物将单链模板合成为DNA。 催化一典型的PCR所需酶量约为2单位。加酶量过多则有可能导致非靶序列的扩增。
Taq DNA 聚合酶缺乏校正功能，在PCR过程中核苷酸掺入错误率可达每循环2 × 10-4个核苷酸，约比使用大肠杆菌DNA聚合酶 I 的Klenow片段时高4倍。对于一个30轮循环的扩增反应来说，这一掺入错误率将导致0.25％的总错误频率。这一频率似随和浓度的升高而增大。这些错误的掺入可以发生在扩增产物的任何位置，既有颠换也有转换（但并无长的缺失、嵌合或插入）。
单位的定义：一单位是指于74ºC将l0 nmol的脱氧核糖核苷酸30分钟内掺入到酸性沉淀的物质中。其实验条件是：25 mM TAPS (pH9.3), 50 mM 氯化钾, 2 mM 氯化镁, 1 mM DTT, 0.5 mg/ml 有活性的鲑鱼精液DNA, 0.2 mM dATP, dCTP, dGTP, dTTP。
● rTth DNA聚合酶
该酶是Thermus thermophilus(Tth)和Thermococcus litoralis(Tli)两种菌中耐热DNA聚合酶的混合。这种混合酶特别具有5’→3’DNA 聚合酶和3’→5’外切酶（校正）的双重活性。当按推荐量使用时，此酶可提高保真度及长链PCR的产量。常规PCR扩增靶DNA序列一般在5 kb以内。而rTth DNA 聚合酶可从人类基因组DNA中扩增至19.6 kb的β－球蛋白基因群和噬菌体λDNA的42 kb的片段。
相关设备： PCR仪，坤科PCR仪，荧光定量PCR，基础PCR，原位型PCR，基因扩增仪，梯度PCR
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